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Analisis de Escherichia Coli

 

En un primer método comienza con una criba, donde una reaccion negativa excluye la presencia de Coli y una positiva indica que es posible que exista.

Para ello en una gradilla se colocan unos tubos y frascos con caldo lactosado simple y doble de concentración, segun la tabla NMP ( más probable) que se haya elegido. Con pipetas estériles se siembran los tubos tomando volumenes de agua en base a la tabla elegida. Se homogenizan los tubos. Incubar a 37º durante 24 horas o incluso hasta 48 horas. Se consideran positivos aquellos en los que aparece enturbiamiento y aparición de gas. El gas se puede apreciar agitando el tubo, apareceran burbujas. La ausencia de gas al cabo de este tiempo indica que la prueba es negativa.

Confirmación. Someteremos a esta prueba a todos los tubos que han dado positivo anteriormente. Cogemos tubos agar eosina azul de metileno. Se funde el medio colocando los tubos a baño María. Lo colocamos sobre Placas de Petri de 10 cm de diametro. Solidificamos. Homogeneizamos cada uno de los tubos a analizar. Resembramos con asa en superficie y por agotamiento sobre el medio sólido en la placa de Petri. Se incuba a 37º las placas invertidas durante 24 horas. Sobre este medio, las bacterias que fermentan la lactosa dan colonias opacas y pigmentadas en rosa, azul o violeta. Colonias diferentes a las anteriores son producidas por bacterias que no fermentan la lactosa.

De cada placa se selecciona una colonia y volvemos a sembrar sobre agar nutritivo inclinado y un caldo lactosado, sin recargar el asa de siembra. Incubamos los dos a 37º durante 24 horas.

Prueba de la oxidasa. Si la colonia aislada fermenta la lactosa con producción de gas se toma una porción de cultivo sobre el agar para investigar la ausencia de oxidasa. Para ello depositamos sobre un trozo de papel de filtro poroso impreganado con dos o tres gotas de reactivo de Kovacs. La presencia de oxidasa se manifiesta por la aparición inmediata de una coloración violeta o pardo violeta. En un principio la coloración es rosa roja y luego se vuelve negra. Toda reaccion tardía es negativa. Cuando se confirma la ausencia de oxidasa, se realiza la prueba IMVIC que confirma la Escherichia.

 

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