Aguas envasadas

La muestra una vez que llega al laboratorio debe mantenerse en lugar fresco y oscuro, la analítica debe realizarse lo antes posible. Es necesario homogeneizar la muestra. Antes de comenzar el análisis habrá que desinfectar el cuello del recipiente, bien a la llama si es vidrio o bien con alcohol 70º si es de otro material.

Escherichia Coli

Son bacetrias coliformes, forma bacilar, Gram -, aerobias y anaerobias facultativas, oxidaxas negativas, no forman esporas, lactosa +, indol + (regularmente), citrato -, rojo de metilo +.

Analisis de Escherichia Coli

Reactivos

• Reactivo de Kovacs indol: paradimetilaminobenzaldehido ( 5 gr ), alcohol amílico ( 75 ml), ácido clorhidrico concentrado ( 25 ml ). Se disuelve el aldehido en el alcohol, mientras se calienta a baño María 60 ºC, posteriormente se añade el acido gota a gota. Se debe conservar a 5 ºC en frasco topacio.
• Rojo de Metilo. Disolver 0,5 gr de rojo de metilo en 100 ml de etanol de 60 º.
• Reactivo Vogues Proskauer - modificado-. Se disuelven 5 gr de alfa naftol en 100 ml de etanol 60º, se disuelven 40 gr de hidroxido de potasio en 100 ml de agua destilada. Se conservan ambos frascos por separado. El primero a 5 º.
• Reactivo Kovacs - citocromo - oxidasa. Es una solución acuosa al 1 % de clorhidrato de tetrametilparafenilendiamina.

Medios de cultivo

• a) Caldo lactosado simple. Extracto de carne (3 gr), peptona (5 gr), lactosa (5 gr) y agua destilada en cantidad suficiente para 1000 ml. Se disuelven cada uno de los componentes por calentamiento y se reparten en tubos Durham 10 ml en cada uno. Los tubos que vayan a recibir volúmenes de agua de 10 ml deberá prepararse el cultivo a doble concentración, si van a recibir 50 ml se usarán las concentraciones iniciales, pero distribuyendo 50 ml en cada tubo. Se esterilizan en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos. El caldo debe tener un pH sobre 6,8 -7
• b) Medio de cultivo sólido agar, lactosa, eosina, azul de metileno. Peptona bacteriologica (10gr), lactosa (10 gr), fosfato dipotásico (2 gr), agar (15 gr), eosina amarillenta (0,4 gr), azul de metileno (0,065 gr) y agua destilada en cantidad suficiente para 1000 ml.
• c) Agar común. Extracto de carne ( 3 gr), peptona bacteriológica (5 gr), agar (15 gr) y agua en cantidad suficiente para 1000 ml. Se disuelve por calentamiento. El pH se lleva a 7. Se esteriliza en autoclave durante 15 minutos. Se deja enfriar en posición inclinada hasta que solidifique.
• d) Agua de triptona. Triptona (10 gr), cloruro sódico (5 gr), agua destilada en cantidad suficiente para 1000 ml.
• e) Medio de triptona, glucosa, fosfato (Clark y Lubs). Triptona (10 gr), fosfato dipotásico ( 5 gr), glucosa ( 5 gr), agua destilada en cantidad suficiente para 1000 ml. Los componentes se disuelven por calentamiento y se reparten sobre 10 ml por tubo. Se esteriliza en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos. Se lleva a pH 7,5
• f) Medio citrato. Sulfato de magnesio (0,2 gr), fosfato monoamónico (1 gr), fosfato dipotásico (1 gr), citrato sódico ( 2 gr), azul de bromotimol (0,08 gr), agar (15 gr), agua destilada en cantidad suficiente para 1000 ml. Se lleva a pH 6,8 y se deja enfriar en posición inclinada.
• g) Caldo lactosado, sales biliares, fosfatos. peptona (20 gr), lactosa ( 5 gr), mezcla de sales biliares (1,5 gr), fosfato dipotasico ( 4 gr), fosfato monopotásico (1,5 gr), cloruro sódico ( 5 gr), agua destilada en cantidad suficiente para 1000 ml.
• h) Medio de cultivo sólido agar - lactosa - trifenil - tergitol 7 ( Medio Chapman TTC modificado). Extracto de carne (5 gr), peptona ( 10 gr ), lactosa ( 20 gr), extracto de levadura ( 6 gr), azul de bromotimol ( 5 ml), agar ( 20 gr), agua destilada en cantidad suficiente para 1000 ml. Se disuelven los componentes por calentamiento y se lleva a pH 7,2. Se esteriliza en autoclave a 121 º C durante 15 minutos. Cuando se vaya a emplear se añade a un frasco 5 ml de disolución TTC al 0,05 % y 5 ml de solución de tergitol 7 al 0,2 %. Se mezcla bien y se disponen en una placa de Petri, dejando solidificar. El espesor debe ser de unos 5 mm.