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Aplicaciones de la respuesta inmune

 

Existen dos tipos de aplicación: 1.- Sueroterapia 2.- Vacunación 3.- Diagnóstico de enfermedades mediante test inmunológicos.

1.- Sueroterapia: Inmunidad artificial pasiva. Es una inmunidad artificial pasiva porque se basa en la administración de Ac producidos en otro vertebrado superior distinto al receptor.Es pasiva porque existen anticuerpos sin desencadenar la respuesta inmune.
.- no existe memoria para el Ag.
.- Es una medida preventiva.
.- No se producen Ac nuevos contra la enfermedad.
.- son efectivos a corto plazo. El cuerpo se deshace de los Ac con el tiempo.
            Existe comercializadas g-globulinas contra la hepatitis B, el tétanos o el virus HIV.
También existen anticueros (antitoxinas) contra venenos de arañas, serpientes, etc.

2.- Vacunación. Es inmunidad artificial activa. Se expone el individuo a material anteigénico no patógeno que desencadena la reacción de respuesta inmune. Activa los linfocitos B y T pero no da la enfermedad.
.- Crea memoria: prepara al cuerpo para una respuesta rápida.
.- Protege para largos periodos.
.- Requiere varios días para desarrollar las defensas.

Estrategias generales en la preparación de vacunas: Existen vacunas con células enteras de bacteria o virus que pueden estar o muertas o atenuadas. Por tratamientos con calor, por ejemplo, la bacteria pasa a un estado en el que no puede proliferar pero aún tiene los determinantes antigénicos. En otros casos se provoca una atenuación de la virulencia hasta dar una bacteria no patógena. Con las vacunas de células atenuadas se necesita un dosis menor porque pueden proliferar un poco, esto es más peligroso.             Otras vacunas son las de partes purificadas del patógeno: son proteínas de los flagelos, glicoproteínas, etc. se purifica la proteína y se administra. En el caso de la vacuna de DNA recombinante se secuencia y subclona en un plásmido, el gen que codifica para un determinado antígeno. Se pasa a levaduras que expresa el determinante antigénico y tenemos el Ag en cantidad para purificarlo. Estos Ag producen más reacciones alérgicas que el resto. En las vacunas de anticuerpos anti-idiotipos los Ac normales o idiotipos poseen su región variable activa como estructura antigénica dando la síntesis de otros Ac llamados anti-idiotipos. Esto es parte de la respuesta inmune. La región variable o anti-idiotipo tiene una estructura semejante al Ag que ha desencadenado su formación. Con estos Ac se puede desencadenar la formación de más Ac contra el Ag. Se sintetizan Ac libres de Ag. El Ac anti-idiotipo se sintetiza para neutralizar el Ac normal. En el caso de los péptidos sintéticos se sintetiza un determinante antigénico que se pone sobre una proteína transportadora, van a defender de Ag de una enfermedad.

3.- Diagnóstico de enfermedades mediante test inmunológicos.  Da la medida de la respuesta inmune “in vitro”. De estos tests se encarga la serología que estudia el diagnóstico “in vitro” de enfermedades en diferentes fluidos. Detectan los Ag y los Ac.

* Reacciones aglutinación y precipitación. Difieren en el tamaño, solubilidad y localización del Ag. La aglutinación precipita células enteras mientras que en la precipitación se precipitan proteínas.
A.- Aglutinación: Una célula entera con determinantes antigénicos en presencia de una aglutinina forma  un agregado que precipita (las aglutininas son Ac). Como los Ag son iguales, se unen y forman una red que precipita.
.- Los test se hacen en portas en donde se pone Ac, si aparecen grumos es porque existe el Ag. Son los tests que se hacen para conocer el grupo sanguíneo.
.- Otras veces se hacen diluciones seriadas del Ag, se hace una titulación, y se añade igual cantidad de Ac, se ve qué volumen mínimo produce grumos.
.- La aglutinación viral es la aglutinación de glóbulos rojos, es una propiedad de determinados virus, si existe aglutinación existen virus.

B.- Precipitación: El determinante antigénico o precipitógeno se une al Ac o precipitina y dan un compuesto que precipita.
.- En un tubo se pone una dilución con suero y se ve si existe precipitado. Si existe exceso de Ac o de Ag el precipitado no se ve. Para que de positivo tiene que existir un equilibrio, es el punto en el que las concentraciones de Ag y Ac son iguales.
.- Test de difusión en agar o geles: es la inmunodifusión. Ambas soluciones difunden desde los agujeros. Cuando existe identidad Ag-Ac se forma una banda. (fotocopias).
.- Inmuinoelectroforesis: se separan las proteínas en un suero a través de un campo eléctrico. En otro pocillo se pone el antisuero y se deja migrar hacia las proteínas se ven Ig y albúminas al aparecer arcos por precipitación sobre el gel de electroforesis.
.- Inmunoblot o western blot: por electroforesis se separan las proteínas, se ponen en una membrana y se les aplica un campo eléctrico, se les añade la solución con el Ac contra el Ag. El Ac se une al Ag si está en la membrana. Se ve esta unión con otro Ac conjugado a un isótopo radiactivo o a una enzima que da una reacción coloreada.
.- Radioinmunoanálisis (RIA) y enzimoinmunoanálisis (ELISA).
Se aumenta la sensibilidad de la unión con la conjugación de Ac con isótopos (RIS) o enzimas (ELISA), en este caso pueden ser la peroxidasa o la fosfatasa alcalina.
Existen dos tipos de ELISA el directo y el indirecto. El directo detecta la existencia de Ag en el suero, mientras que el indirecto lo que detecta es el AC, estos últimos son los más comunes (HIV, Richtsias, vibrio,etc.). (fotocopias). En el indirecto se pone un segundo Ac que une la enzima, este Ac 2º de revelado pone de relieve la existencia de un Ac 1º y por tanto la existencia del Ag. Al añadir el sustrato de la enzima se produce una reacción enzimática que da color si la reacción es positiva.
.- Inmunofluorescencia: Los Ac están conjugados a fluorocormos como la fluoresceína o la rodamina que emiten luz visible cuando se irradian con UV. Puede ser directo cuando usando el Ag desconocido se ensaya con Ac fluorescente, pero puede ser indirecto si usando Ac desconocido se ensaya con un Ag conocido, aquí existe reacción positiva cuando el 2º Ac que es fluorescente se une al 1º. La base es semejante al ELISA. (Ej. diagnóstico de sífilis).
.- Ac monoclonales: Cuando se da la respuesta inmune en un vertebrado y se le extrae los Ac, los antisueros son policlonales. Un agente patógeno provoca muchas reacciones inmunológicas a la vez frente a diferentes Ag. Los Ac monoclonales son deseables tanto en terapia como en herramientas de investigación. Para producirlos se usó el hibridoma que es la fusión de 2 células diferentes el linfocito B que no es utilizable “in vitro”, no se pueden cultivar, y los mielomas, que son tumores de linfocitos B de ratón que si se podían cultivar, se dividen sin parar, como son células tumorales sus Ac no son usables, son defectivos Al fusionarse ambas células se complementan, la fusión da una célula llamada hibridoma que si es cultivable y produce Ac. Se le inyecta a un ratón, se le sacan los linfocitos B del bazo y se fusionan con células tumorales con la sustancia PEG que fusiona las membranas plasmáticas.
Luego se seleccionan las que se han fusionado de las que no. Esto lo hacemos mediante el método HAT.
De todos los hibridomas se selecciona el que posee la fusión deseada, cada uno tiene un clon de hibridomas diferente con un Ac distinto y se selecciona el hibridoma, se purifican los Ac monoclonales. El Ac monoclonal purificado se le inyecta de nuevo a un ratón para que produzca más.

 

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