Clostridium Botulimun

CARACTERISTICAS

• G (+), familia Bacillaceae, esporulados, anaerobios, sin cápsula.
• Bacilos rectos o ligeramente curvados de 2-10 x 0,5-2 micras.
• Esporas ovales, subterminales y deformán la célula cuando se producen.
• El comportamiento metabólico no es uniforme referentes a la proteolisis y a la producción de exotoxinas.
• Producen 7 toxinas serolicamente diferentes y aunque con acción farmacologica igual se les designa con letras de la A a la G y las cepas productoras también llevan la misma nomenclatura.
• Moviles mediante flagelos perítricos y con 4 antígenos distintos: somático, flagelar, esporas. endotoxinas.
• Es el productor del Botulismo
• Es una toxiinfección alimentaria producida por ingerir alimentos con la toxina.
• La forma vegetativa es sensible, la cepa E se puede destruir a 45º, debido a que son psicótrofas.
• La mayor parte de cepas fermentan carbohidratos
• No reducen los nitritos a nitratos
• Producen sulfidrico y acetil metil carbinol (VP+).
• Las esporas son más resistentes al calor, resisten 105º durante 10 minutos, a excepción de las esporas de las cepas E que se inactivan a 80º durante 6-10 minutos.
• Las esporas en condiciones normales de sequedad en el ambiente viven años.
• pH óptimo de 4,6 - 8 para la célula vegetativa
• Temperatura óptima de 25-35º
• Sensible a las sal, necesitan una concentracion de sal inferior al 10% y Aw > 0,935 y condiciones de anaerobiosis.

HABITAT Y EPIDEMIOLOGIA

• El reservorio es el ire, tierra y polvo, también pueden estar en el agua; existe botulismo animal con clínica similar, la intoxicación con conservas caseras es más frecuente que con las conservas industriales.
• La incidencia está asociada a los distintos tipos de suelo: Cepa A, suelos neutros o alcalinos; Cepa B, suelos ricos en materia orgánica; Cepa C,D suelos variados; Cepa E, suelos húmedos.
• La presencia de otras cepas competitivas junto al clostridium pueden influir en el crecimiento de este. De esta forma los lactobacilos y enterobacterias originan ácidos que impiden el crecimiento del Clostridium, otros microorganismos producen pH neutro o alcalino como muchas bacterias o mohos en las conservas de tomate y de esta forma favorecen al clostridium.
• Los alimentos que podrían estar implicados: las conservas (vegetal y animal) sobre todo las caseras ya que estas no suelen reunir las condiciones térmicas adecuadas y no se inactivan todas las esporas, tienen que darse condiciones de anaerobiosis, por regla general los alimentos ácidos y salados son inhibidores. La miel es peligrosa debido a un potencial uso en niños, puede aparecer el Botulismo infantil.

PATOGENIA

Es debida a la producción de toxinas que aparecen al crecer el microorganismo en los alimentos. Las toxinas son proteicas y termolábiles, se destruyen a 100º durante 5 minutos, a 80º durante 30 minutos o a 70º durante 60 minutos. Se producen como prototoxinas que necesitan ser activadas por enzimas proteoliticos que pueden ser de origen endogeno o exógeno. Las toxinas purificadas obtenidas en el laboratorio aparecen como complejos de toxinas y otras sustancias (hemaglutininas). Los diferentes tipos de toxinas se diferencian en el grado de polimerización, en la composición de aa y en el requerimiento de activación del enzima. Las toxinas botulínicas A son muy tóxicas (neurotóxicas), tienen gran afinidad por las células nerviosas.

MECANISMO DE ACCION

Son ingeridas con los alimentos, absorbiendose en el estómago o intestino delgado, tambien a través de heridas en condiciones de anaerobiosis; pasan a sangre y a la linfa donde son transportadas a los lugares de acción, llegan a las terminaciones nerviosas colinérgicas del S.N periférico, inhibiendo la liberación de acetil colina, de todas formas existe impulso nervioso y la sensibilidad de la célula no está alterada, no tienen actividad sobre el sistema nervioso central.

CLINICA

Incubación de 18-36 horas.

Síntomas: parálisis flácida, simétrica y descendente, en principio no cursa con fiebre aunque posteriores infecciones si pueden darla. El individuo se mantiene consciente, pulso normal, nauseas, vómitos, visión borrosa, dilatación del ojo, dificultad de deglución, las mucosas orales presentan aspecto seco, debilidad muscular, la muerte aparece por parada cardiorespiratoria al cabo de una semana. existen antitoxinas comerciales, si es tratado puede haber recuperación pero de larga convalecencia. El botulismo a aprtir de heridas presenta clinica similar, pero no existe cuadro gástrico. El botulismo infantil se caracteriza por: estreñimiento, al cabo de 1-30 días de la ingestión aparece dificultad en la succión, llanto, en los casos más graves muerte súbita (la miel juega un papel importante)

PREVENCION Y CONTROL

Someter a los alimentos conservados de acidez escasa a alta temperatura. Con los productos cárnicos curados se usan tratamientos térmicos no esterilizantes a 60º con nitritos como agente conservante y de baja Aw.

INVESTIGACION

Se trata de poner de manifiesto y detectar la toxina en el alimento, solo cuando se producen casos de botulismo es interesante buscar la espora y toxina en el alimento.. La toxina botulinica es muy tóxica por lo que su manipulación debe hacerse con cuidado, puede producirse la inmunización del personal así como disponer insitu de la antitoxina bajo control facultativo.

Preparación de la muestra

Se esteriliza la lata por donde se va abrir con alcohol y se flamea con cuidado porque las toxinas son sensibles al calor, se debe observar las caracteristicas del envase: si está hinchado, color,... Se mezclan a partes iguales muestra y tampón fosfato, homogeneizamos y se centrifuga a 3500 rpm durante 30 minutos a 4º, desde esta forma precipitan todos los sólidos y queda sobrenadante claro, en el sobrenadante se detecta la toxina y en el sedimento se detectan las cálulas o esporas.

Sedimento

Se alienta para eliminar la flora competitiva y formas vegetativas, se debe trabajar con muestras no calentadas para ver la presencia de toxina E, hacen falta 3 baterías de tubos con 15 ml de caldo de carne cocida, en tres tubos caliento a baño a 60º, otros 3 tubos caliento a 80º y otros tres tubos sin calentar. Siembro cada tubo con 1 ml. de muestra y luego se someten a la misma temperatura durante 30 minutos. En los tubos de 60º y 80º mueren las formas vegetativas y esporas del grupo E, en los tubos a temperatura ambiente no muere nada. Luego incubamos a 30º durante 5 días, si al cabo de 5 días no hay crecimiento se dejan otros 15 días por si tarda en germinar, se hace la tinción de Gram y ver si son positivos. El cultivo se centrifuga refrigerado y obtengo un sobrenadante (b) y un sedimento. A partir del sedimento se siembra en agar yema de huevo para anaerobios y se incuba a 30º durante 72 horas. Las colonias de clostridium son con borde regular rodeadas de precipitado amarillento debido a la actividad lipolítica que da lugar a ácidos grasos que precipitan son de aspecto nacarado. Se seleccionan las colonias típicas y se vuelven a sembrar en caldo de carne cocida o en caldo tripticasa peptona glucosa extracto de levadura con tripsina. Si se sospecha de esporas E, para activarla incubamos a 25-26º.

Sobrenadante

Tengo dos: el de la suspensión fosfato y el del cultivo.

Se divide en tres alicuotas: una se calienta a 100º durante 5 minutos; otra sin calentar se diluye 1:5 y a la otra se añade tripsina 1 % tampón fosfato. Con esto se inoculan 2 ratones blancos de un peso de 18-20º y se añade 0,5 ml vía intraperotoneal. Se observan los síntomas durante 72 horas. Normalmente a las 24 horas el pelo aparece erizado, la respiración dificil, contracción abdominal, debilidad en las extremidades, paralisis progresiva, disnea y muerte. ( existen sueros comerciales antitóxicos)

Para tipificar la toxina:

1.- Se diluye 1:5 la antitoxina polivalente en solución fisiológica esteril 0,85 % y se mezclan, 0,5 ml. de muestra y 0,5 ml. de antitoxina se mezcla bien y reposo 1 hora. Inoculo a dos ratones con 0,5 ml vía intraperitoneal y veo la clínica.

2.- Inocular vía intraperitoneal los ratones con 0,5 ml de las antitoxinas, dejamos 1 hora y posteriormente se inocula la muestra ( 0,5 ml. diluida 1:5 ), se deja 72 horas y se ven los resultados.