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Clostridium Perfringens (Welchii)

 

CARACTERISTICAS

  • Son bacilos G(+), rectos de 4-8 x 0,5-1,5 micras, familia Bacillaceae.
  • Esporulan en medios definidos, esporas ovaladas subterminales y no abomban la célula, inmoviles y anaerobios estrictos.
  • Producen sulfidrico, lecitinasa, reducen los nitritos, fermentan azucares
  • Producen 4 toxinas y se clasifican en A, B, C, D, E. En el hombre interesa la A que es la que produce la gangrena gaseosa y las toxiinfecciones alimentarias, las cepas A producen la toxina alfa, las del tipo C son las responsables de la enteritis necrosante.
  • Son microorganismos con necesidades complejas en su cultivo necesitan aminoacidos y factores de crecimiento. La temperatura óptima de las toxinas es 43-47º, la máxima 50º, aunque la temperatura depende de la cepa. Las toxinas necesitan un pH próximo a 7,5 y las especies vegetativas son muy sensibles al oxígeno.
  • Existe antagonismo entre el clostridium y algunas especies de streptococcus y lactobacillus, estas últimas al crecer dan pH ácidos e inhiben al clostridium, las formas vegetativas son sensibles a la refrigeración y congelación. Las esporas son bastante resistentes al calor, resisten 100º 1 hora, la germinación se produce a 70-80º.

HABITAT Y EPIDEMIOLOGIA

Es uno de los más distribuidos, el reservorio es el suelo, polvo, tubo digestivo, piel, las moscas contribuyen al transporte de las esporas.

En frío cualquier alimento puede vehiculizarlo, los brotes principales han sido en alimentos cárnicos, en comidas preparadas en grandes cantidades o en salsas, incluso contaminación in situ por manipuladores, el tipo C fue el responsable en Alemania después de la 2ª Guerra Mundial de necrosis entéricas por ingestión de conservas de carne.

PATOLOGIA

Se debe a la producción de toxinas, muchas de ellas histotóxicas, producen una enterotoxina presente en los tipos A, C, D. La toxina alfa (fosfolipasa) es letal, provoca aumento de la permeabilidad de las membranas celulares. La toxina responsable de la toxiinfección alimentaria parece ser que es una enterotoxina de las esporas porque solo parece producirse cuando el microorganismo esporula en el intestino, en general no está presente antes de la ingestión. Esta enterotoxina es una proteína termolábil, aumenta la permeabilidad de las células intestinales y produce un aumento de la motilidad, produce perdida masiva de agua, cloro y sodio e inhibe que se absorba la glucosa, la acción la ejerce en el ileon.

La toxina beta, toxina letal para los animales de experimentación, en ocasiones también en humanos, es necrótica y aumenta la permeabilidad vascular. Es una toxina sensible a la tripsina, se inactivaría en el estómago y por este motivo una baja ingesta proteica que disminuye la secreción de tripsina favorecería la acció de ella.

En el caso de la del tipo A la enfermedad aparece al cabo de 8-24 horas tras la ingesta del alimento.

CLINICA

Dolor abdominal, diarrea acuosa ( no hay sangre ni moco ), nauseas, cuadro benigno que desaparece a las 12-18 horas.

La enteritis necrotizante, producida por cepas tipo C, presenta una incubación de 24 horas, dolor abdominal, diarrea con sangre, vómitos, necrosis intestinal.

INVESTIGACION

Se añaden a los medios ciertos antibioticos para inhibier a las anaerobios facultativos (neomicina, polimixina), el enriquecimiento se basa en esto inhibir a unos para favorecer a otros, para el aislamiento se emplean medios con yema de huevo o emplear sulfitos más hierro.

1.- Tecnica en tubos.

Suspensión madre 1:10 en solución Ringer con cisteina y se realizan diluciones seriadas. Se siembra 1 ml de cada dilución en tubos estériles con tapón de rosca (150x20). Se añaden 15 ml. de agar TSN atemperado a 47º, se solidifica y se cubre con 3 ml de parafina estéril, incubamos a 46º durante 24-48 horas y se produce sulfuro de hierro de color negro, las colonias se veran negras a lo largo del tubo y se cuentan, de esta forma el número de colonias por el factor de dilución nos indicará el número de microorganismos por gramo de alimento.

2.- Método del NMP

Se siembran series de 5 tubos con RCM medio para clostridium con neomicina y se incuban a 46º durante 48 horas. De cada tubo se siembran 0,1 ml en agar TSCY (agar triptosa sulfito cicloserina), podemos ver la reacción de la lecitinasa, por tener el medio sulfito se produce sulfídrico que con el hierro produce sulfuro de hierro, aparece un halo blanco alrededor de las colonias por precipitación de ácidos grasos. Una vez sembradas y secas se cubre con una capa de 10 ml de TSC estéril y se coloca en anaerobiosis. De esta forma se calcula el NMP.

Prueba de Willis, es una placa de LYL (agar lactosa leche yema de huevo). En mitad de la placa se deposita antitoxina alfa y luego se siembra ese medio en forma rombo

PREVENCION Y CONTROL

Evitar cocinar los alimentos en grandes cantidades, higiene adecuada en la manipulación, enfriamiento y refrigeración adecuadas, evitar cocinar con mucha antelación.

 

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